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植物過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒代測樣本需要注意的

發(fā)布時間:2017-05-09   點擊次數(shù):2776次

植物標本的采集及保存 
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
3、 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yimi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存?zhèn)溆茫?/span>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。

 

6.植物標本中相關酶或蛋白的測定:(粗提?。?/span>
1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3、 請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。

 

樣本收集注意事項

1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。

計算方法示例:繪制標準曲線:在Excel工作表中

以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值。(如上圖所示)

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